食品中亞硝酸鹽的快速檢測 鹽酸萘乙二胺法

1　范圍

本方法規(guī)定了食品中亞硝酸鹽的快速檢測方法。

本方法適用于肉及肉制品（餐飲食品）中亞硝酸鹽的快速測定。


2　原理

樣品中的亞硝酸鹽經(jīng)提取后，在弱酸性條件下與對氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘乙二胺反應生成紫紅色偶氮化合物，其顏色的深淺在一定范圍內與亞硝酸鹽含量成正相關，通過色階卡進行目視比色，對樣品中亞硝酸鹽進行定性判定。


3　試劑和材料

除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。

3.1　試劑

3.1.1　對氨基苯磺酸。

3.1.2　鹽酸萘乙二胺。

3.1.3　鹽酸。

3.1.4　鹽酸（20%）：量取20mL鹽酸，用水稀釋至100mL。

3.1.5　對氨基苯磺酸溶液（4g/L）：稱取0.4g對氨基苯磺酸，溶于100mL20%鹽酸中，混勻，置棕色瓶中，臨用新制。

3.1.6　鹽酸萘乙二胺溶液（2g/L）：稱取0.2g鹽酸萘乙二胺，溶解于100mL水中，混勻，置棕色瓶中，臨用新制。

3.2　參考物質

亞硝酸鈉參考物質中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質量見表1，純度≥99%。

表1 亞硝酸鈉中文名稱、英文名稱、CAS登記號、分子式、相對分子質量

中文名稱

英文名稱

CAS登錄號

分子式

相對分子質量

亞硝酸鈉

Sodiumnitrite

7632-00-0

NaNO2

69.00

3.3　標準溶液配制

亞硝酸鈉標準工作液（200μg/mL，以亞硝酸鈉計）：精密稱取適量經(jīng)110℃—120℃干燥恒重的亞硝酸鈉參考物質（3.2），加水溶解，移入250mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。

3.4　材料

亞硝酸鹽快速檢測試劑盒：適用基質為肉及肉制品，需在陰涼、干燥、避光條件下保存。


4　儀器和設備

4.1　移液器：200μL，1mL。

4.2　渦旋混合器或超聲儀。

4.3　電子天平或手持式天平：感量為0.01g和0.0001g。

4.4　離心機。

4.5　微孔濾膜：0.45μm（水系）。


5　分析步驟

5.1　試樣制備

取適量有代表性樣品的可食部分，充分粉碎混勻。

5.2　試樣的提取

準確稱取試樣1g（精確至0.01g），置于離心管中，準確加水10mL，超聲或渦旋振蕩提取5min，靜置10min。準確吸取1mL上清液（如樣品渾濁，≥3000r/min離心5min取上清液，或經(jīng)微孔濾膜過濾后取續(xù)濾液）于檢測管中，向檢測管中滴加對氨基苯磺酸溶液200μL，混勻靜置1min，再加入鹽酸萘乙二胺溶液100μL，混勻靜置5min，即得待測液。

5.3　測定步驟

將待測液與標準色階卡目視比色，10min內判讀結果。進行平行試驗，兩次測定結果應一致，即顯色結果無肉眼可辨識差異。

5.4　質控試驗

每批樣品應同時進行空白試驗和質控樣品試驗（或加標質控試驗）。用色階卡和質控試驗同時對檢測結果進行控制。

5.4.1　空白試驗

稱取空白樣品，按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作。

5.4.2　質控樣品試驗（或加標質控試驗）

亞硝酸鹽質控樣品：采用典型樣品基質或相似樣品基質按照實際生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的，含有一定量亞硝酸鹽，并可穩(wěn)定保存的樣品。經(jīng)參比方法確認的質控樣品中亞硝酸鹽含量（以亞硝酸鈉計）應包括但不限于10mg/kg。

加標質控樣品：準確稱取空白試樣1g（精確至0.01g），置于離心管中，加入適量亞硝酸鈉標準工作液（200μg/mL）（3.3）使樣品中亞硝酸鈉含量為10mg/kg。

質控樣品（或加標質控樣品）按5.2和5.3步驟與樣品同法操作。


6　結果判定要求

觀察檢測管中樣液顏色，與標準色階卡比較判讀樣品中亞硝酸鹽（以亞硝酸鈉計）的含量。顏色淺于檢出限（1mg/kg）則為陰性樣品；顏色深于10mg/kg則為陽性樣品。色階卡見圖1。

注：1.顏色接近或深于1mg/kg，但淺于或接近10mg/kg時，則考慮本底污染或帶入所

2.10mg/kg僅作為本方法的本底控制限。

圖片

圖1 亞硝酸鹽色階卡

質控試驗要求：空白試驗測定結果應為陰性，質控樣品試驗測定結果應在其標示量值允差范圍內，加標質控試驗測定結果應與加標量相符。


7　結論

由于色階卡目視判讀存在一定誤差，為盡量避免出現(xiàn)假陰性結果，讀數(shù)時遵循就高不就低的原則。當測定結果大于10mg/kg時，應對結果進行確證。


8　性能指標

8.1　檢測限：1mg/kg。

8.2　靈敏度：靈敏度應≥99%

8.3　特異性：特異性應≥85%。

8.4　假陰性率：假陰性率應≤1%。

8.5　假陽性率：假陽性率應≤15%。

注：性能指標計算方法見附錄A。


9　其他

本方法所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時不作限定。方法使用者在使用替代試劑、試劑盒或操作步驟前，須對其進行考察，應滿足本方法規(guī)定的各項性能指標。

本方法參比方法為GB 5009.33-2016《食品安全國家標準食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定—第二法分光光度法》。

待測樣品中若存在高含量的亞硫酸氫鈉、抗壞血酸或醬油時，會對本法的顯色結果產(chǎn)生一定影響，檢測時應予以注意。

色階卡應確保在試劑盒保質期內不出現(xiàn)褪色或變色的情況。

附錄A



快速檢測方法性能指標計算表

表A.1 性能指標計算表 

文章（文字）來源：食品論壇網(wǎng)友分享